전체 글11 Cloning (1) 고찰 Cloning (1) 고찰 cloning의 실험 과정 중 절반을 끝낸 상태로 Ligation까지 마무리하였다. 6조는 1.1KB의 크기를 가지고 있는 Fragment와 Vector를 사용하였다. 현재까지 진행된 전반적인 실험 내용은 Fragment와 Plasmid DNA를 뽑아내어 제한효소를 처리하고, 그로부터 얻어진 sticky end를 가진 Insert와 Vector를 Ligation 시켰다. 11월 8일에는 Fragment 부분을 얻기 위해 PCR, Agarose gel electrophoresis, Gel extraction을 해주었고 11월 15일에는 Vector로 사용할 순수한 Plasmid DNA를 얻기 위해 Plasmid DNA prep을 해주었다. 그다음으로 실험을 통해 얻은 Fragme.. 2023. 12. 16. Cloning(2) 고찰 Cloning(2) 고찰 전반적인 흐름은 Cloning 3주 차까지 ligation 해서 만든 Plasmid를 competent cell에 넣어주고 항생제 처리가 된 LB 배지에 배양한다. 우리가 원하는 Plasmid는 항생제를 억제하고 colony를 형성하게 된다. colony로부터 우리가 원하는 Plasmid가 존재하는지 알아보기 위해 Colony PCR을 진행하고 전기영동을 해줌으로써 염기서열을 확인할 수 있게끔 만들어준다. 형질전환을 하기 전에 DNA를 넣어줄 competent cell과 그 cell이 항생제로부터 이겨내어 colony를 형성할 수 있게 해 줄 LB 배지를 만들어 주어야 한다. LB plate 만들기 Ligation 한 Plasmid DNA를 넣어줄 예정인 c.p cell(reco.. 2023. 12. 6. RNA isolation 고찰 Trizol RNA Extraction cell이 dish에 깔려있었는데 media 배지를 제거하고 1 ml trizol로 cell을 떼어내어 e-tube에 옮겨 담았다. 그 이후에 200 chloroform을 넣어주었다. 원심분리를 해주면 organic phase, interphase, aqueous phase로 3개의 층으로 분리되었음을 확인하였다. 그중 상층액만 따서 isopropanol과 새로운 e-tube에 섞고 원심분리를 하면 RNA pellet이 보이게 된다. 상층액을 제거하고 pellet에 ethanol을 넣어 pellet을 풀어주고 vortex 후 원심분리를 하게 되면 또다시 pellet이 생성된다. ethanol을 증발시키기 위해 e-tube를 뒤집어 놓아 air dry 시키고 30 D.. 2023. 12. 6. RNA isolation RNA isolation 이 실험에서는 RNA를 세포에서 분리하는 것이 목적이다. Trizol은 RNA나 DNA를 분리할 때 쓰는 시약이며, Chloroform을 첨가하면 3개의 층으로 나누어진다. 가장 밑층에는 단백질, 중간층에는 DNA가 존재하며 가장 상층에는 RNA가 존재한다. 상층을 pipette를 이용하여 분리할 때 중간층을 건들지 않도록 주의가 필요하다. 앞에서 언급한 바와 같이 RNA는 2‘-hydroxyl group이 존재하며 이에 따라 RNase로 인하여 쉽게 파괴된다. RNase는 다양한 RNA를 파괴할 수 있으며 RNase는 거의 모든 세포에 존재하며 피부 표면에도 존재한다. 그러므로 대부분의 실험실 기구에는 RNase로 오염되어 있으며 RNase를 효과적으로 제거할 수 있는 방법은 .. 2023. 12. 6. 이전 1 2 3 다음
